核转录因子-κB拮抗剂对大鼠海马CA1区局灶性脑缺血再灌注损伤的影响

摘要：目的 观察局灶性脑缺血再灌注后大鼠右侧海马CA1区的远隔损害变化及核转录因子(NF)-κB拮抗剂的调节作用,探讨远隔损害区内的炎性变化及NF-κB拮抗剂抗炎调节作用的可能机制.方法 将Sprague-Dawley (SD)雄性大鼠按照随机数字表法随机分为假手术组(n=24)、模型组(缺血再灌注组;n=38)、药物组[NF-κB必需调节蛋白结合区(NBD)多肽组;n=38]及对照组(NBD转化多肽组;n=38),按再灌注后的时间点24 h和7d再将上述4组各分为2个亚组.利用改良线栓法制备右侧大脑中动脉闭塞再灌注模型.利用右侧海马注射NF-κB拮抗剂NBD多肽及NBD转化多肽干预后检测白细胞介素1β和白细胞介素1-Ra的含量变化,采用苏木素-伊红(HE)及Fluoro-Jade B(FJB)染色法观察神经元的损伤及表达变化,利用免疫荧光双标及蛋白质印迹法检测神经细胞内NF-κB p65及NF-κB抑制蛋白α的表达量及表达部位.结果 模型组大鼠海马CA1区细胞胞核内NF-κB p65蛋白的表达(24 h,2.340±0.101;7d,2.440±0.081)较药物组(24 h,0.206±0.013;7d,0.090±0.012)及假手术组(24 h,0.120±0.007;7d,0.100±0.014)明显升高(q =64.431、66.704、67.747、56.624,均P＜0.05),同时模型组的IL-1β含量[24 h(1.850±0.192) ng/ml,7 d(1.000±0.178) ng/ml]较药物组[24 h(1.250±0.211) ng/ml,7 d(0.560±0.183) ng/ml]显著升高(g=10.730、9.710,均P＜0.05).模型组(24 h,27.50％±3.59％;7 d,28.10％±4.46％)及对照组(24 h,27.30％±4.53％;7d,26.30％±5.03％)中HE染色显示神经细胞存活百分比相较药物组(24 h,58.90％±3.46％;7 d,68.40％±4.20％)明显降低(q=19.949、19.731、2.139、22.249,均P＜0.05),FJB染色显示模型组(24 h,28.10±2.13;7d,29.50±2.45)神经细胞损伤数目明显高于药物组(24h,12.50±2.41;7 d,9.30±2.52,q=3.211、4.521,均P＜0.05),模型组与对照组上述结果差异无统计学意义(P＞0.05);与其他3组比较(假手术组24 h,0.130±0.008;7 d,0.150±0.010;模型组24h,1.340±0.213;7 d,1.750±0.119,对照组24 h,1.250±0.114;7d,1.620±0.097),药物组大鼠海马细胞胞核内IκBα蛋白表达(24 h,1.680±0.148;7d,2.010±0.085,q=6.348、9.139、9.414、1.711、5.277、5.555,均P＜0.05)明显升高.与模型组[24 h(0.570±0.028) ng/ml,7 d(0.430±0.039) ng/ml]及对照组[24 h(0.490±0.042) ng/ml,7 d(0.380±0.018) ng/ml]比较,药物组内IL-1Ra含量[24 h(1.390±0.055) ng/ml,7 d(1.250±0.043) ng/ml,q =4.577、6.205、9.683、6.389,均P＜0.05]明显升高.结论 脑缺血再灌注能引起大鼠海马区的远隔损害并诱发严重的炎性反应,NBD多肽能通过改变NF-κB p65及IκBc蛋白的表达变化有效抑制炎性反应,从而缓解脑缺血再灌注诱发的远隔损害.